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lunes, 9 de noviembre de 2009

Técnicas en investigación: Marcaje de anfibios con microchips



Para el estudio de las poblaciones de animales a medio y largo plazo es imprescindible tener individualizados a los animales que serán el objeto de nuestro estudio. Para ello se hace necesario identificar a esos animales mediante marcas que dependiendo de las especies con las que trabajemos varian en su complejidad.

Las marcas más conocidas son las anillas, tanto metálicas como de PVC de lectura a distancia que se colocan en las patas de las aves (y otras especies como los murciélagos) y que por regla general son métodos muy sencillos ya que requieren de una manipulación muy breve y no necesitan de ningún tipo de técnica quirúrgica. Pero en otras especies, debido a sus características morfológicas y de comportamiento no es posible este tipo de marcaje. Esto es lo que ocurre con los anfibios, que debido a la sensibilidad de su piel y a las características de la misma hace que sea prácticamente imposible el uso de marcas externas.

Actualmente estamos desarrollando varios proyectos de investigación con Rana bermeja y con Salamandra común en los que utilizamos microchips para marcar a los individuos. Estos microchips se tienen que introducir dentro del cuerpo de los animales y posteriormente mediante el uso de un lector podremos identificar cada marca sin falta de extraerlo de su cuerpo.

En los últimos años se ha avanzado mucho en el uso de este tipo de tecnologías, que han sido desarrolladas básicamente para su empleo en ganadería o como método de identificación de animales de compañía. Este avance ha permitido reducir el tamaño de los microchips de forma que no interfieran en el comportamiento natural de los individuos marcados. Las marcas que estamos utilizando son de la casa AVID y son pequeños cilindros de cristal biocompatible de unas dimensiones de 7 x 1 mm dentro del cual se encuentra encapsulado el microchip. Este microchip lleva programado un código único e inalterable de forma que cada individuo marcado podrá ser identificado sin ninguna confusión.

El marcaje de las ranas suele ser bastante sencillo, ya que al contrario de lo que ocurre con otros anfibios como los tritones o las salamandras, la piel de estas es muy elástica y nos permite realizar el proceso muy rápidamente y sin necesidad de anestesiar a los animales, ya que la marca se coloca directamente debajo de la piel. 

1) Se hace una incisión en la piel de la rana con una aguja

2) Se introduce el microchip debajo de la piel

 
3) El microchip se empuja con los dedos hasta que desaparece completamente bajo la piel

Una vez introducido el microchip, éste se desplaza debajo de la piel hasta dejarlo lo más lejos posible de la incisión y evitar que se pueda salir durante los dos o tres días que tarda en cerrarse. Una vez marcadas las ranas se espera unas horas para asegurarse de que las marcas no se salgan y se las libera.

En el caso de las salamandras el proceso es más complejo ya que los microchips deben ser introducidos dorsolateralmente y la piel no es tan elástica como en las ranas por lo tanto hay que realizar una pequeña cirugía. En primer lugar los animales son anestesiados en un baño de benzocaina y una vez que se han dormido se procede al marcaje.

1) Se hace una pequeña incisión poco profunda con un bisturí

2) Se introduce el microchip y se empuja suavemente hasta que desapareza completamente

3) Se cierra la herida con un apósito líquido

4) Salamandra después del marcaje

Una vez terminado el proceso de marcaje, las salamandras se lavan con agua para eliminar los restos de benzocaina y se dejan hasta que pasen los efectos de la anestesia. Normalmente se despiertan completamente al cabo de 3 o 4 horas, aun así las dejamos durante 24 horas en el laboratorio antes de liberarlas. Todo el proceso de marcaje, tanto para ranas como para salamandras, es muy seguro y no hemos tenido que lamentar ninguna baja durante o depués del marcaje, a pesar de haber marcado mas de 1000 individuos entre las dos especies.

Después de liberarlos en el lugar de captura cada individuo marcado no se reconocerá externamente y será necesario utilizar un lector específico que al acercarlo al animal nos indicará en una pantalla el código del mismo.

16 comentarios:

  1. Hola David, nosotros tenemos los pits pero aun no nos pusimos. Pero la tecnica que habiamos visto para salamandras no era en cavidad celomica sino dorsal. Despues te escibo un mail. Saludos.

    Cesar

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  2. Espero que algún día nos cuentes, aunque sea de manera sucinta, los resultados de los experimentos.
    Un saludo

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  3. César, antes de marcar las salamadras estuve mirando en varios artículos y pregunté a gente que las había marcado y todos metían las PITs en la cavidad abdominal. Como comentaba, las salamandras al contrario que las ranas no se marcan tan bien y en el dorso parecían muy difíciles de marcar, aun así yo no lo intenté. Ya hablaremos.

    Gilberto, ya pondré los resultados, pero todas estas historias llevan tiempo porque se necesitan muchas recapturas para obtener unos resultados fiables. Por ahora te puedo decir que al menos en la población de salamandras que estamos estudiando en los alrededores de la facultad me he quedado muy sorprendido porque de 51 bichos que había marcado el año pasado, este año ya llevamos recuperados 27, que es un montón. Los resultados de las ranas ya están mucho más avanzados porque llevamos más de 5 años marcando y estamos ahora analizando los datos para publicar los resultados.
    un saludo

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  4. Muy interesante y didáctico este post. Esta técnica parece muy adecuada para anfibios, y quizás también para reptiles (evitando las dramáticas amputaciones de dedos tan usadas).
    Pero, ¿es una técnica barata? A cuanto sale, más o menos, cada microchip? Y el lector?

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  5. Hola David!
    Siempre me daba curiosidad como las marcan a las ranas... ya lo veo gracia a ti. Espero que un dia podria acompañarte al monte y encontrar las ranas marcadas! Un beso.
    Yeon

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  6. Hola FR, el marcaje con microchips no es barato, actualmente cada marca nos sale a unos 3 euros, y el precio varía según la cantidad que compres. Por otra parte, el lector más sencillo cuesta unos 300 euros. Luego puedes añadir equipo extra, como antenas fijas para controlar los movimientos y demás artilugios y el precio se dispara.

    Hola Yeon!! pues ya sabes, cuando quieras te pasas por aquí y nos vamos a buscar ranas y salamandras. Las salamandras las tengo caminando por debajo de la facultad así que más fácil imposible.

    un abrazo

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  7. Hola David, hace ya bastante tiempo que estudio una población de salamandras en Catalunya, en mi caso el metodo es diferente ya que las reconozco individualmente por la fotografia de los ejemplares y el reconocimiento por sus características manchas, inconfundibles en cada ejemplar adulto, ..no hay dos iguales. Hablo de S. s. terrestris, pero claro en Cantábria, hay una gran influencia de la forma rayada "fastuosa", que complica el reconocimiento individual por presentar un patrón más homogéneo, peró no sé hasta que punto pueden imposibilitar la identificación, fotografiando dorsal y ventralmente cada animal, lo digo, por lo económico y nada incruento del sistema (el tuyo tampoco parece mucho, pero claro la fotografia, es menos).
    Por cierto, que estudias densidades, sex ratio, ciclos de actividad..?
    Xavi

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  8. Hola de nuevo David.
    Realmente no es barato, pero pensé que sería aún más caro.
    Lo que dices de las antenas fijas, ¿lo has probado? Creía que la distancia de lectura del microchip era muy pequeña (centímetros), pero ¿es posible seguir lo movimientos de ranas o salamandras (por una zona determinada claro) sin tener que recapturarlas?

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  9. Hola Xabi, nosotros también hacemos fotos de las salamandras, pero comprobamos que después de un par de años el diseño puede cambiar, además aqui la subespecie es la bernardezi que es listada y da mas problemas. De todas formas con el uso de PIT tags no hace falta capturarlas de nuevo y se puede hacer un muestreo rápido con el lector sin moverlas del sitio.

    FR, lo de las antenas todavía no lo probamos, estamos pensando en ello. En principio se trataría de que los bichos pasaran por encima y normalmente al arrastrarse o caminar encima no habría problema para leer las marcas. Luego aparte de la antena habría que instalar un ordenador pequeño que registre los datos y demas historias, así que el montaje aparte de caro es sensible (sobre todo al choriceo), por lo que hay que mirar bien donde se pone.
    un saludo

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  10. Xabi, se me olvidaba, lo que estudiamos por ahora es dinámica poblacional y tasas de mortalidad. Aun nos queda mucho por analizar pero también queremos hacer cosas de viviparismo, al tener los individuos marcados podemos seguir su vida durante varios años.

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  11. Hola,
    nosotros los hemos comprado algo mas baratos, 100 pits 186€, el lector 235€. Yo creo que he leido o visto algo de que dejaban el lector en puntos de paso y se registraba el movimiento de los animales. Pero, 1) tiene que haber muchos animales, 2) tiene que estar muy claro por donde van a pasar, no se si sera muy extrapolable a otras zonas.
    Tambien estan los elastomeros, que no son caros, pero no los he probado.

    Cesar

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  12. Hola César, ¿de que marca son los pits y el lector? Mandame un mail con los detalles porque a lo mejor estamos haciendo el primo, jeje.
    Los elastómeros los probamos con las truchas y funcionan bien, yo había leido que se usaban con renacuajos pero nosotros no los usamos.
    un saludo

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  13. mmmhhh .... no me convence del todo, tiene que haber mejores maneras de hacerlo..


    En concreto pienso que tendríais que examinar si es conveniente colocar el microchip en la espalda de las hembras. ¿que hay del amplexus en éstos animales marcados?

    La presión podría molestarles y ser un handicap a la hora de reproducirse ¿lo habéis examinado?

    pvaldes

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  14. Seguramente digo una tontería, no debe ser posible: pero siendo las marcas de la piel únicas en cada indivíduo (de salamandra) ¿no podrían diferenciarse así? Parece muy difícil pero con las huellas dactilares se hace.

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  15. Hola Manel, a todos los animales que vemos les hacemos una fotografía, tanto para medirlos como para identificarlos, y pudimos comprobar que aunque las manchas permanecen casi inalterables a veces cambian un poco y hace difícil la identificación.
    Por otra parte cuando tienes marcados casi 200 individuos, el tiempo de manipulación para identificarlos cada vez que los ves sería ingente porque habría que recapturarlos y fotografiarlos de nuevo. Lo que yo hago ahora es ir pasando el lector por encima de cada individuo que encuentro y sin moverlas del sitio voy grabando la marca, de esa forma puedo conocer el individuo y el lugar exacto donde está sin tocarlas ni molestarlas.
    Por otra parte, al usar este tipo de microchips te permite colocar antenas por la parcela de forma que cada vez que pase un individuo por encima puedas registrar sus movimientos.
    En cuanto a lo que dice Pablo Valdés sobre las posibles molestias al animal y a su reproducción, te puedo asegurar que tras más de 5 años marcando ranas y salamandras (mas de 2000 animales en total) no encontramos ningún efecto, ni en mortalidad ni problemas en reproducción. Tanto los machos como las hembras se reproducían normalmente año tras año y los amplexus eran normales. Hay que tener en cuenta que se trata de una marca de tan sólo 7 mm de longitud, completamente inerte y estéril.
    un saludo

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  16. Se agradece tu respuesta, piensa que los que no somos del sector tendemos a ser muy exagerados con estas cosas. Estoy seguro de que ya lo teneis más que controlado y no supone ningún problema. De verdad que me gustaría venir a verlo !

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